当免疫细胞被冷冻保存以后，治疗疾病的效果会受影响吗？科学家给出了答案

来源：博雅

日期： 2023.11.08

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引言

随着冷冻技术的发展，越来越多的研究人员采用冷冻保存的免疫细胞来开发免疫疗法。那么，冷冻保存的免疫细胞在临床上的效果会受到影响吗？今日通过一篇发表在Front Oncol.杂志上的文献来回答这个问题。研究人员发现，冷冻保存对细胞治疗产品质量影响很小，冷冻保存的免疫细胞回收量足够使用，冷冻保存的细胞产品仍然表现出高的抗肿瘤活性。因此，冷冻细胞具有很好的治疗效果，并且不会影响临床结局。

随着细胞冷冻技术的发展，利用冷冻复苏的细胞来治疗疾病的方法在临床得到试用。近年来，利用冷冻保存的免疫细胞来制备新型免疫疗法在火热发展中，一些在研产品获得了FDA的快速通道指定，例如，今年，国际上Artiva Biotherapeutics在研的冷冻保存的NK细胞疗法AB-101获得美国FDA授予的快速通道指定(FTD),用于与抗CD20单克隆抗体利妥昔联合治疗复发/难治性B细胞非霍奇金淋巴瘤。

那么，经过冷冻后，细胞的功能会改变吗？科学研究发现，冷冻复苏后的细胞依然保持着活力与功能。日前，发表Front Oncol.杂志上的文献通过剖析当下越来越普遍的CAR-T免疫细胞治疗，阐述了冷冻保持对免疫细胞治疗临床结局的影响。

新文献揭示：冷冻细胞具有很好的治疗效果

在当今医学领域， CAR-T免疫细胞治疗血液系统恶性肿瘤无疑是最引人瞩目的研究领域之一。美国食品药品监督管理局（FDA）批准了多种用于复发或难治性血液系统恶性肿瘤患者的CAR-T疗法，我们国家也有3款CAR-T免疫细胞治疗产品获批上市，同时全球还有数百项CAR-T治疗血液系统恶性肿瘤和实体瘤的临床试验正在开展中。凭借独特的优势和巨大的潜力，CAR-T细胞治疗已经引发了全球科研人员的广泛关注。

CAR-T细胞的生产过程包括分离外周血单个核细胞（PBMC）、激活并转导CAR基因、扩增和生产质量QC测试。最近的一项临床试验在118名接受新鲜CAR-T细胞治疗的患者中，比较了冷冻保存对CAR-T细胞的效力和增殖能力的影响，以及冷冻保存与新鲜输注产物的抗肿瘤反应性[1]。

研究表明，冷冻的CAR-T细胞在后续的存储和扩增过程中能够生成足够的细胞数量用于治疗，且保持了抗肿瘤效能和特异性，取得了较好的治疗效果。尽管新鲜细胞在体外反应性方面稍微占优势，但使用冷冻细胞作为起始物质和冷冻CAR-T细胞输注产物仍然是可行的选择，因为冷冻细胞具有很好的治疗效果，并且不会影响临床结局。冷冻细胞与CAR-T细胞治疗为血液系统恶性肿瘤患者提供了一种有效的治疗选择。

要点一：冷冻保存对样品质量没有影响

研究结果显示，在CAR-T细胞的生产过程中，冷冻样品中红细胞的数量显著降低，但冷冻保存对外周血单个核细胞（PBMC）的亚群组成【即NK、B细胞、单核细胞、CD4+和CD8+ T细胞】没有影响（图1）。由于新鲜的PBMC转导效率较低，在生产过程结束时新鲜和冷冻样本的CAR-T细胞的总数相似。

图1. 新鲜PBMCs与冷冻PBMCs的比较[1]

冷冻保存对CAR-T细胞的表型和细胞效力也没有影响。此外，二者体外抗肿瘤反应性相似。因此，在CAR-T细胞的生产过程中，冷冻保存可以作为可行的选择，以延长细胞产品的储存时间。

要点二：冷冻保存的免疫细胞回收量足够使用

在培养过程中，CAR-T细胞在第6-8天被冷冻保存，平均保存29天。大部分患者的CAR-T细胞在解冻后能继续增殖。解冻后，细胞先扩增7倍，再在2至3天内扩增2.1倍，总数达到618±525*10^6。所有患者的CAR-T细胞剂量都达到了1*10^6 CART/kg的目标（图2）。7名患者中有4人病情完全缓解。因此，冷冻保存的CAR-T细胞在解冻增殖后可以生成足够的细胞数量用于患者的治疗。