最新临床：9名重症下肢缺血患者接受胎盘间充质干细胞治疗后，获得显著改善

2020年，印度药品管理总局(DCGI)批准了同种异体间充质干细胞疗法Stempeucel上市，用于治疗伯格氏病(Buerger's Disease)和动脉粥样硬化性周围动脉疾病引起的重症下肢缺血(CLI)。近年来，关于间充质干细胞治疗严重下肢缺血的临床结果不断输出。

近日，《Stem Cell Research & Therapy》发表了一项剂量递增的一期临床研究 [1]，评估了9名患有重症下肢缺血对人胎盘间充质干细胞治疗的耐受性，并评估了这种方法的可行性和耐受性。

结果表明，胎盘间充质干细胞注射后，所有受试者的身体功能和临床并发症都有显著改善。大多数康复患者在首次胎盘间充质干细胞注射后2至3个月显示出症状的缓解，并在六个月随访评估中持续存在。

重症下肢缺血（CLI）是外周动脉疾病中最严重的一种，可导致静息痛、伤口不愈合、坏疽和截肢。美国食品和药物管理局（FDA）尚未批准任何药物用于治疗CLI患者。

血管内血流重建或开放手术是目前改善患肢血液供应的标准治疗方法。对于无法手术且没有其他选择的患者来说，他们只能通过伤口护理、疼痛控制甚至截肢来减少疾病并发症。据估计，这些患者的死亡率为30%，截肢风险为40%。鉴于治疗限制和高死亡率，CLI患者的生活质量与末期癌症患者的生活质量相当。

近年来，一些新的、更有效的治疗方法已经出现，如干细胞疗法，是治疗这些无选择患者的可行替代方案。

间充质干细胞具有发育为内皮细胞和产生血管生成因子的能力，可以促进组织再生，诱导血管生成，恢复缺血区域的血液循环。它们具有维持稳态和抗凋亡特性，同时在炎症条件下也具有免疫调节能力。间充质干细胞可以作为再生医学的同种异体干细胞来源，而不会引起细胞排斥反应。

胎盘来源的间充质干细胞（P-MSCs）与其他MSCs几乎具有相同的形态特征，可以维持长端粒，表现出Oct4和SSEA-3等多能性标志物，并能进行三系分化。P-MSCs表达有限水平的HLA-A、HLA-B和HLA-C分子，降低了其免疫原性并增加了移植适应性。

这项研究包括9名CLI患者，其中2名为糖尿病足患者，7名为血栓闭塞性脉管炎（TAO）患者。通过常规的血管造影确认入选的CLI患者存在完全动脉闭塞，下肢无血流。

胎盘间充质干细胞治疗分为两个时间点进行，间隔为八周。在进行注射前，患者接受100毫克的氢化可的松治疗，以减轻过敏等副作用。注射前30分钟和注射后6小时测量氧饱和度。

使用30G针头，将悬浮液肌肉内注射，深度为1–1.5厘米。注射面积为10 × 6厘米，共有30–40个位点，每个位点注射0.5–1.0毫升的P-MSCs。将膝盖到脚踝的区域平均分为五个部分，并分为四行（即腿的前部、前侧和浅后部），此外在足背和伤口周围（如果有伤口）还确定了六个注射点（图一、图二）。

图一：肌肉注射P-MSC的临床试验方法[1]。

图二：流程图，研究中招募了15名患者，并将其分为两组[1]。

结论1：P-MSC治疗是安全的

P-MSC治疗无明显副作用，且未达到最大耐受剂量（MTD）。测试剂量中包括60×106的最高剂量的P-MSCs，在肌内给药后耐受性良好。

对CLI患者在P-MSC治疗前和治疗后6个月的免疫谱（如IL-1、IFN-γ和TNF-α）以及淋巴细胞亚群（如CD4、CD8和CD25）进行评估。

结果显示，在P-MSC治疗后6个月的随访期间，IL-1和IFN-γ的血清水平显著降低（图三）。P-MSC治疗前后，CLI患者的血液淋巴细胞亚群没有明显变化（图四），表明p-MSC注射对CLI患者的免疫状态没有不良影响，并且是完全安全的。

图三：首次输注后第0天（基线）和6个月患者血清炎性细胞因子水平的变化[1]。

图四：在筛选和P-MSC植入后6个月随访时测量CLI患者的CD4、CD8和CD25标志物[1]。

结论2：P-MSC治疗促进血管生成

研究评估了细胞注射后6个月的动脉血管造影数据，并根据侧支血管的发展程度将其分为四个等级：+ 0（无侧支循环），+ 1（轻度侧支循环），+ 2（适度侧支循环）和+ 3（高侧支循环）。治疗后，侧支血管形成评分提高至0.98 ± 0.3。

图五：植入胎盘间充质干细胞（P-MSC）6个月后血管造影术中侧支动脉发育的变化[1]。

结论3：P-MSC使患者疼痛减轻

这项研究结果表明，细胞注射后，所有参与者的生活功能和静息疼痛都显著改善。尽管有一名患者在六个月的随访前进行了截肢手术，但注射后的腿部也有显著改善。所有参与者对自己的结果感到满意，并且观察到休息疼痛的缓解导致活动表现显著提高，特别是连续行走，同时使用镇痛药的比例显著降低（图六）。

图六：疗效参数[1]

结论4：P-MSC促进伤口愈合

此外，在所有患有缺血性溃疡的患者中，观察到了相当大的改善或完全愈合。即使我们必须在注射前或注射后对少数患者进行轻微截肢，截肢后的伤口也会愈合，并且总伤口面积的测量也大大减少（图七）。

图七：在6个月的随访中，显示缺血性溃疡/坏疽进展的治疗肢体的表现[1]。

间充质干细胞是目前能够实现治疗重症下肢缺血，建立血管生成的最令人期待的细胞。根据多国多项研究发现，间充质干细胞能够通过调节免疫、促进血管生成和分泌生物活性因子起到恢复组织功能和修复缺血组织的作用。同时研究发现，间充质干细胞移植能有效且安全的改善患肢临床症状，减轻患者痛苦，降低截肢率，提高患者生存质量。在这项研究中，尽管患者人数较少，但一些晚期疾病阶段的疗效结果对于患者和他们的家人以及研究者来说无疑非常重要和令人鼓舞，也向人们展示了胎盘间充质干细胞治疗重症下肢缺血的临床潜力。

[1] Shirbaghaee, Z. et al. Report of a phase 1 clinical trial for safety assessment of human placental mesenchymal stem cells therapy in patients with critical limb ischemia (CLI). Stem Cell Research & Therapy 14, 174 (2023).